Ассоциация числа копий эндогенных ретровирусов типа А с гематологическими показателями и полом у мини-свиней

Свинья является наиболее перспективным видом для ксенотрансплантации органов и клеток человеку. Внедрение ксенотрансплантации в клиническую практику сдерживается возможным риском передачи реципиенту зоонозных инфекционных заболеваний. Эндогенные ретровирусы свиней (PERV) способны встраиваться в геном клетки в виде ДНК-копий. Три типа ретровирусов PERV – А, В и С – различаются по нуклеотидной последовательности гена env. PERV типа A и B могут инфицировать некоторые линии клеток человека in vitro. Для широкого внедрения ксенотрансплантации необходим поиск простых фенотипических признаков, по которым можно отбирать животных с наименьшим числом ретровирусов в геноме. Целью работы было выявление корреляции числа копий гена envA PERV c гематологическими показателями, полом и окраской у мини-свиней Института цитологии и генетики (ИЦиГ) СО РАН. Были определены референсные значения восемнадцати параметров крови для мини-свиней, включая  абсолютное  содержание лейкоцитов (WBC), эритроцитов (RBC) и тромбоцитов (PLT), абсолютное (LYM#) и относительное (LYM%) содержание лимфоцитов, абсолютное (MID#) и относительное (MID%) содержание моноцитов, базофилов и эозинофилов, абсолютное (GRA#) и относительное (GRA%) содержание гранулоцитов, гематокрит (HCT) и тромбокрит (PCT), средний объем эритроцита (MCV) и тромбоцита (MPV). Показатели WBC, MID# и GRA#, а также относительная ширина распределения эритроцитов по объему (RDW-CV) у самцов были достоверно выше, чем у самок. Самки превосходили самцов по средней концентрации гемоглобина в эритроцитарной массе (MCHC) и относительной ширине распределения тромбоцитов по объему (PDW-CV). Корреляционный анализ показал отсутствие связи между числом копий гена envA PERV на клетку и окраской животных. По-видимому, сайты инсерции ретровирусов у мини-свиней либо находятся на одной и той же хромосоме, но на значительном генетическом расстоянии от генов KIT (хромосома 8) и MC1R (хромосома 6), контролирующих окраску, либо локализованы с ними на разных хромосомах. Число копий гена envA PERV у самцов было ниже, чем у самок. Наиболее вероятной причиной гендерных различий является локализация нескольких копий PERV-А на Х хромосоме мини-свиней. Таким образом, материал для ксенотрансплантации целесообразно брать у самцов миниатюрных свиней ИЦиГ СО РАН.

ксенотрансплантация, мини-свиньи ИЦиГ СО РАН, свиной эндогенный ретровирус, PERV, ген envA, пол, окраска, анализ крови

1. Aitnazarov R.B., Ermolaev V.I., Nikitin S.V., Savina M.A., Kobzev V.F., Knyazev S.P., Goncharenko G.M., Bekenyov V.A., Yudin N.S. Association of endogenous retroviruses of different types with genetic markers in populations of domestic and wild pigs. Proc. of the Russ. Academy of Agricult. Sci. 2006;4:39-43. (in Russian)

2. Aitnazarov R.B., Yudin N.S., Kiril'chuk R.S., Kochnev N.N., Knyazev S.P., Voevoda M.I. Determination of the copy numbers of type A porcine endogenous retroviruses in domestic pigs and wild boars. Vavilovskii Zhurnal Genetiki i Selektsii = Vavilov Journal of Genetics and Breeding. 2016;20(6):756-761. DOI 10.18699/VJ16.192. (in Russian)

3. Aitnazarov R.B., Yudin N.S., Nikitin S.V., Ermolayev V.I., Voevo-da M.I. Identification of whole genomes of endogenous retroviruses in Siberian miniature pigs. Russ. J. Genet.: Appl. Res. 2014;4(6):523-525. DOI 10.1134/S2079059714060021.

4. Denner J. How active are porcine endogenous retroviruses (PERVs)? Viruses. 2016; 8(8):E215. DOI 10.3390/v8080215.

5. Ekser B., Bianchi J., Ball S., Iwase H., Walters A., Ezzelarab M., Ve-roux M., Gridelli B., Wagner R., Ayares D., Cooper D.K. Comparison of hematologic, biochemical, and coagulation parameters in a1,3-galactosyltransferase gene-knockout pigs, wild-type pigs, and four primate species. Xenotransplantation. 2012;19(6):342-354. DOI 10.1111/xen.12007.

6. Ekser B., Cooper D.K., Tector A.J. The need for xenotransplantation as a source of organs and cells for clinical transplantation. Int. J. Surgery. 2015;23:199-204. DOI 10.1016/j.ijsu.2015.06.066.

7. Garcia-Montojo M., Dominguez-Mozo M., Arias-Leal A., Garcia-Martinez A., De las Heras V, Casanova I., Faucard R., Gehin N., Madeira A., Arroyo R., Curtin F., Alvarez-Lafuente R., Perron H. The DNA copy number of human endogenous retrovirus-W (MSRV-type) is increased in multiple sclerosis patients and is influenced by gender and disease severity. PLoS ONE. 2013;8(1):e53623. DOI 10.1371/ journal.pone.0053623.

8. Godehardt A.W., Rodrigues Costa M., Tonjes R.R. Review on porcine endogenous retrovirus detection assays - impact on quality and safety of xenotransplants. Xenotransplantation. 2015;22(2):95-101. DOI 10.1111/xen.12154.11.

9. Jung W.Y., Kim J.E., Jung K.C., Jin D.I., Moran C., Park E.W., Jeon J.T., Lee J.H. Comparison of PERV genomic locations between Asian and European pigs. Anim. Genetics. 2010;41(1):89-92. DOI 10.1111/j.1365-2052.2009.01953.x.

10. Ka S., Kerje S., Bornold L., Liljegren U., Siegel P.B., Andersson L., Hallbook F. Proviral integrations and expression of endogenous avian leucosis virus during long term selection for high and low body weight in two chicken lines. Retrovirology. 2009;6:68. DOI 10.1186/1742-4690-6-68.

11. Kawaguchi H., Yamada T., Miura N., Takahashi Y., Yoshikawa T., Izu-mi H., Kawarasaki T., Miyoshi N., Tanimoto A. Reference values of hematological and biochemical parameters for the world smallest microminipigs. J. Vet. Med. Sci. 2012;74(7):933-936. DOI 10.1292/jvms.11-0571.

12. Kimsa M.C., Strzalka-Mrozik B., Kimsa M.W., Gola J., Nicholson P., Lopata K., Mazurek U. Porcine endogenous retroviruses in xenotransplantation - molecular aspects. Viruses. 2014;6(5):2062-2083. DOI 10.3390/v6052062.

13. Kondrakhin S.P. (Editor). Methods of veterinary clinical laboratory diagnostics: Handbook. M.: KolosS Publ., 2004. (in Russian)

14. Lee D., Lee J., Yoon J.K., Kim N.Y., Kim G.W., Park C., Oh Y.K., Kim Y.B. Rapid determination of PERV copy number from porcine genomic DNA by real-time polymerase chain reaction. Anim. Bio-technol. 2011;22(4):175-180. DOI 10.1080/10495398.2011.595294.

15. Liu G., Li Z., Pan M., Ge M., Wang Y., Gao Y. Genetic prevalence of porcine endogenous retrovirus in chinese experimental miniature pigs. Transplant. Proc. 2011;43(7):2762-2769. DOI 10.1016/j.transproceed.2011.06.061.

16. Ma Y., Yang Y., Lv M., Yan Q., Zheng L., Ding F., Wu J., Tian K., Zhang J. Real-time quantitative polymerase chain reaction with SYBR green I detection for estimating copy numbers of porcine endogenous retrovirus from Chinese miniature pigs. Transplant. Proc. 2010;42(5):1949-1952. DOI 10.1016/j.transproceed.2010.01.054.

17. Mazurek U., Kimsa M.C., Strzalka-Mrozik B., Kimsa M.W., Adam-ska J., Lipinski D., Zeyland J., Szalata M., Slomski R., Jura J., Smorag Z., Nowak R., Gola J. Quantitative analysis of porcine endogenous retroviruses in different organs of transgenic pigs generated for xenotransplantation. Curr. Microbiol. 2013;67(4):505-514. DOI 10.1007/s00284-013-0397-3.12.

18. McMichael J.C., Stiers S., Coffin S. Prevalence of feline leukemia virus infection among adult cats at an animal control center: association of viremia with phenotype and season. Am. J. Vet. Res. 1986;47(4): 765-768.

19. McPhaul M.J., Matsumine H., Herbst M.A., Wilson J.D. Aromatase expression in extragonadal tissues of the Sebright chicken is controlled by a retroviral promoter. Trans. Assoc. Am. Physicians. 1991;104: 141-149.

20. Murphy W.G. The sex difference in haemoglobin levels in adults -mechanisms, causes, and consequences. Blood Rev. 2014;28(2):41-47. DOI 10.1016/j.blre.2013.12.003.

21. Niebert M., Tonjes R.R. Evolutionary spread and recombination of porcine endogenous retroviruses in suiformes. J. Virol. 2005;79(1): 649-654.

22. Nikitin S.V., Shatokhin K.S., Knyazev S.P., Goncharenko G.M., Zaporozhets V.I., Ermolaev V.I. Polymorphic loci of coat color in mini pigs. Vavilovskii Zhurnal Genetiki i Selektsii = Vavilov Journal of Genetics and Breeding. 2016;20:584-595. (in Russian)

23. Rispat G., Slaoui M., Weber D., Salemink P., Berthoux C., Shrivas-tava R. Haematological and plasma biochemical values for healthy Yucatan micropigs. Laboratory Animals. 1993;27(4):368-373.

24. Roca A.L., Nash W.G., Menninger J.C., Murphy W.J., O'Brien S.J. Inser-tional polymorphisms of endogenous feline leukemia viruses. J. Virol. 2005;79(7):3979-3986. DOI 10.1128/JVI.79.7.3979-3986.2005.

25. Sambrook J., Russell D.W. The Condensed Protocols from Molecular Cloning: A Laboratory Manual. N. Y.: Cold Spring Harbor Lab. Press, 2006.

26. Seperack P.K., Mercer J.A., Strobel M.C., Copeland N.G., Jenkins N.A. Retroviral sequences located within an intron of the dilute gene alter dilute expression in a tissue-specific manner. EMBO J. 1995;14(10):2326-2332.

27. Tandon R., Cattori V., Willi B., Meli M.L., Gomes-Keller M.A., Lutz H., Hofmann-Lehmann R. Copy number polymorphism of endogenous feline leukemia virus-like sequences. Mol. Cell. Probes. 2007;21(4):257-266. DOI 10.1016/j.mcp.2007.01.003.

28. Tikhonov V.N. Laboratory mini pigs, genetics and biomedical use. Novosibirsk: Publ. House SB RAS, 2010. (in Russian)

29. Yu P., Zhang L., Li S.F., Cheng J.Q., Lu Y.R., Zeng Y.Z., Li Y.P., Bu H. A rapid method for detection of the copy number of porcine endogenous in swine. J. Rapid Methods Autom. Microbiol. 2007;15(2):199-205. DOI 10.1111/j.1745-4581.2007.00082.x.

30. Yudin N.S., Aitnazarov R.B., Ermolaev V.I. Porcine endogenous retroviruses: what are the risks of infection transmission in xenotransplantation? Russ. J. Genet.: Appl. Res. 2011;1(6):532-539. DOI 10.1134/S207905971106013X.

31. Zhang P., Yu P., Wang W., Zhang L., Li S., Bu H. An effective method for the quantitative detection of porcine endogenous retrovirus in pig tissues. In Vitro Cell. Dev. Biol. - Animal. 2010;46(5):408-410. DOI 10.1007/s11626-009-9264-8.