Методы геномного редактирования дрожжей: история и современное состояние


https://doi.org/10.18699/VJ17.321

Полный текст:


Аннотация

Дрожжи являются модельным эукариотическим организмом, на котором отрабатываются многие предположения о работе генома, а также методы его редактирования. Наиболее часто в исследовательских работах используют Saccharomyces cerevisiae, которые очень хорошо приспособлены физиологически к культивированию в условиях биореактора и признаны абсолютно безопасными. В последнее десятилетие методы генетической инженерии дрожжей претерпели значительные изменения. Появились новые инструменты, которые пришли из смежных направлений и позволили значительно ускорить процесс получения новых штаммов. Прежде всего это белки для направленного внесения изменений в последовательность ДНК. Длительное время методы редактирования генома дрожжей базировались на использовании их собственной системы гомологичной рекомбинации. Она удобна и удовлетворяла потребности исследователей на протяжении нескольких десятилетий, до того времени, когда на первый план стали выходить высокопроизводительные методы. Во втором десятилетии XXI века произошло бурное развитие высокопроизводительных подходов, в первую очередь методов анализа в биологии: геномики, транскриптомики, протеомики, метаболомики, интерактомики и др. Сформировалась биоинформационная база, которая позволила быстро обрабатывать растущий поток информации и моделировать клеточные процессы. В результате скорость анализа и предсказания мишеней для редактирования генома стала превышать скорость их получения, что, естественно, обусловило поиск новых методов генетической инженерии. Особенно сильно этот процесс затронул работы по модификации свойств микроорганизмов. Современные задачи стали требовать не единичных модификаций, а десятков и сотен, а иногда тысяч модификаций. В результате исследователи, занимающиеся дрожжами, стали вовлекать в работу новые инструменты геномного редактирования, которые ранее развивались для изучения более сложных объектов, таких как животные, растения, клеточные линии и др. Современные методы геномной инженерии дрожжей позволяют вносить несколько модификаций в геном за один шаг. В данном обзоре рассматривается вопрос применения и перспектив дальнейшего развития методов направленного редактирования генома в инженерии дрожжей.

Об авторах

А. С. Розанов
Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук.
Россия
Новосибирск.


В. Н. Шляхтун
Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук.
Россия
Новосибирск.


Л. А. Текутьева
Дальневосточный федеральный университет; ООО «АРНИКА».
Россия
Владивосток.


О. М. Сон
Дальневосточный федеральный университет; ООО «АРНИКА».
Россия
Владивосток.


С. В. Сизова
ЗАО «Центр новых технологий и бизнеса»; Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук.
Россия
Москва.


С. Е. Пельтек
Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук.
Россия
Новосибирск.


Список литературы

1. Bao Z., Xiao H., Liang J., Zhang L., Xiong X., Sun N., Si T., Zhao H. Homology-integrated CRISPR-Cas (HI-CRISPR) system for onestep multigene disruption in Saccharomyces cerevisiae. ACS Synth. Biol. 2015;4:585-594. DOI 10.1021/sb500255k.

2. Barrangou R., Fremaux C., Deveau H., Richards M., Boyaval P., Moineau S., Romero D.A., Horvath P. CRISPR provides acquired resistance against viruses in prokaryotes. Science. 2007;315(5819): 1709-1712. DOI 10.1126/science.1138140.

3. Bitinaite J., Wah D.A., Aggarwal A.K., Schildkraut I. FokI dimerization is required for DNA cleavage. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998;95:10570-10575. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/ PMC27935/.

4. Bohmert K., Camus I., Bellini C., Bouchez D., Caboche M., Benning C. AGO1 defines a novel locus of Arabidopsis controlling leaf development. EMBO J. 1998;17(1):170-180. DOI 10.1093/emboj/17.1.170.

5. Bolotin A., Quinquis B., Sorokin A., Ehrlich S.D. Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs) have spacers of extrachromosomal origin. Microbiology. 2005;151(8):2551-2561. DOI 10.1099/mic.0.28048-0.

6. Botstein D., Chervitz S.A., Cherry M.J. Yeast as a model organism. Sci ence. 1997;277(5330):1259-1260. https://www.ncbi.nlm.nih. gov/ pmc/articles/PMC3039837/.

7. Burgess S., Cheng L., Gu F., Huang J., Huang Z., Lin S., Li J., Li W., Qin W., Sun Y., Songyang Z., Wei W., Wu Q., Wang H., Wang X., Xiong J.W., Xi J., Yang H., Zhou B., Zhang B. Questions about NgAgo. Protein Cell. 2016;7(12):913-915. DOI 10.1007/s13238016-0343-9.

8. Cen Y., Timmermans B., Souffriau B., Thevelein J.M., Van Dijck P. Comparison of genome engineering using the CRISPR-Cas9 system in C. glabrata wild type and lig4 strains. Fungal Genet. Biol. 2017;107:44-50. DOI 10.1016/j.fgb.2017.08.004.

9. Cerutti L., Mian N., Bateman A. Domains in gene silencing and cell differentiation proteins: the novel PAZ domain and redefinition of the Piwi domain. Trends Biochem. Sci. 2000;25:481-482. DOI 10.1016/ S0968-0004(00)01641-8.

10. Cong L., Ran F.A., Cox D., Lin S., Barretto R., Habib N., Hsu P.D., Wu X., Jiang W., Marraffini L.A., Zhang F. Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science. 2013;339(6121):819823. DOI 10.1126/science.1231143.

11. DiCarlo J.E., Norville J.E., Mali P., Rios X., Aach J., Church G.M. Genome engineering in Saccharomyces cerevisiae using CRISPR-Cas systems. Nucleic Acids Res. 2013;41(7):4336-4343. DOI 10.1093/nar/gkt135.

12. Durai S., Mani M., Kandavelou K., Wu J., Porteus M.H., Chandrasegaran S. Zinc finger nucleases: custom-designed molecular scissors for genome engineering of plant and mammalian cells. Nucleic Acids Res. 2005;33:5978-5990. DOI 10.1093/nar/gki912.

13. Farzadfard F., Perli S.D., Lu T.K. Tunable and multifunctional eukaryotic transcription factors based on CRISPR/Cas. ACS Synth. Biol. 2013;2:604-613. DOI 10.1021/sb400081r.

14. Fernandez R., Berro J. Use of a fluoride channel as a new selection marker for fission yeast plasmids and application to fast genome editing with CRISPR/Cas9. Yeast. 2016;33:549-557. DOI 10.1002/yea.3178.

15. Gao F., Shen X.Z., Jiang F., Wu Y., Han Ch. DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute. Nat. Biotechnol. 2016;34(7):768-773. DOI 10.1038/nbt.3547.

16. Gao Y., Zhao Y. Self-processing of ribozyme-flanked RNAs into guide RNAs in vitro and in vivo for CRISPR-mediated genome editing. J. Integr. Plant Biol. 2014;56:343-349. DOI 10.1111/jipb.12152.

17. Gasiunas G., Barrangou R., Horvath P., Siksnys V. Cas9–crRNA ribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptive immunity in bacteria. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2012;109:E2579E2586. DOI 10.1073/pnas.1208507109.

18. Generoso W.C., Gottardi M., Oreb M., Boles E. Simplified CRISPRCas genome editing for Saccharomyces cerevisiae. J. Microbiol. Methods. 2016;127:203-205. doi.org/10.1016/j.mimet.2016.06.020.

19. Godde J.S., Bickerton A. The repetitive DNA elements called CRISPRs and their associated genes: evidence of horizontal transfer among prokaryotes. J. Mol. Evol. 2006;62(6):718-729. DOI 10.1007/ s00239-005-0223-z.

20. Guo J., Gaj T., Barbas C.F. Directed evolution of an enhanced and highly efficient FokI cleavage domain for zinc finger nucleases. J. Mol. Biol. 2010;400(1):96-107. DOI 10.1016/j.jmb.2010.04.060.

21. Haft D.H., Selengut J., Mongodin E.F., Nelson K.E. A guild of 45 CRISPR-associated (Cas) protein families and multiple CRISPR/Cas subtypes exist in prokaryotic genomes. PLoS Comput. Biol. 2005;1(6):E60. DOI 10.1371/journal.pcbi.0010060.

22. Horvath P., Barrangou R. CRISPR/Cas, the immune system of bacteria and archaea. Science. 2010;327(5962):167-170. DOI 10.1126/science. 1179555.

23. Horwitz A.A., Walter J.M., Schubert M.G., Kung S.H., Hawkins K., Platt D.M., Hernday A.D., Mahatdejkul-Meadows T., Szeto W., Chandran S.S., Newman J.D. Efficient multiplexed integration of synergistic alleles and metabolic pathways in yeasts via CRISPR-Cas. Cell Systems. 2015;1(1):88-96. doi.org/10.1016/j.cels.2015.02.001.

24. Ishino Y., Shinagawa H., Makino K., Amemura M., Nakata A. Nucleotide sequence of the iap gene, responsible for alkaline phosphatase isozyme conversion in Escherichia coli, and identification of the gene product. J. Bacteriol. 1987;169(12):5429-5433. https://www. ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC213968/.

25. Jacobs J.Z., Ciccaglione K.M., Tournier V., Zaratiegui M. Implementation of the CRISPR-Cas9 system in fission yeast. Nat. Commun. 2014;5:5344. DOI 10.1038/ncomms6344.

26. Jakočiūnas T., Bonde I., Herrgård M., Harrison S.J., Kristensen M., Pedersen L.E., Jensen M.K., Keasling J.D. Multiplex metabolic pathway engineering using CRISPR/Cas9 in Saccharomyces cerevisiae. Metab. Eng. 2015;28:213-222. DOI 10.1016/j.ymben.2015.01.008.

27. Jansen R., Embden J.D., Gaastra W., Schouls L.M. Identification of genes that are associated with DNA repeats in prokaryotes. Mol. Microbiol. 2002;43(6):1565-1575. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11952905.

28. Javidi-Parsijani P., Niu G., Davis M., Lu P., Atala A., Lu B. No evidence of genome editing activity from Natronobacterium gregoryi Argonaute (NgAgo) in human cell. PLoS ONE. 2017;12(5):e0177444. DOI 10.1371/journal.pone.0177444.

29. Jensen E.D., Ferreira R., Jakočiūnas T., Arsovska D., Zhang J., Ding L., Smith J.D., David F., Nielsen J., Jensen M.K., Keasling J.D. Transcriptional reprogramming in yeast using dCas9 and combinatorial gRNA strategies. Microb. Cell Fact. 2017;16(1):46. DOI 10.1186/s12934-017-0664-2.

30. Jensen M.K., Keasling J.D. Recent applications of synthetic biology tools for yeast metabolic engineering. FEMS Yeast Res. 2015;15(1): 1-10. DOI 10.1111/1567-1364.12185.

31. Jinek M., Chylinski K., Fonfara I., Hauer M., Doudna J.A., Charpentier E. A programmable dual-RNA–guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity. Science. 2012;337(6096):816-821. DOI 10.1126/science.1225829.

32. Joung J.K., Sander J.D. TALENs: a widely applicable technology for targeted genome editing. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2013;14(1):4955. DOI 10.1038/nrm3486.

33. Khin N.C., Lowe J.L., Jensen L.M., Burgio G. No evidence for genome editing in mouse zygotes and HEK293T human cell line using the DNA-guided Natronobacterium gregoryi Argonaute (NgAgo). PLoS ONE. 2017;12(6):e0178768. DOI 10.1371/journal.pone.0178768.

34. Kim Y.G., Cha J., Chandrasegaran S. Hybrid restriction enzymes: zinc finger fusions to Fok I cleavage domain. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996;93:1156-1160. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/ PMC40048/.

35. Kuijpers N.G., Solis-Escalante D., Bosman L., van den Broek M., Pronk J.T., Daran J.-M., Daran-Lapujade P. A versatile, efficient strategy for assembly of multi-fragment expression vectors in Saccharomyces cerevisiae using 60 bp synthetic recombination sequences. Microb. Cell Fact. 2013;12(1):47. DOI 10.1186/1475-2859-12-47.

36. Laughery M.F., Hunter T., Brown A., Hoopes J., Ostbye T., Shumaker T., Wyrick J.J. New vectors for simple and streamlined CRISPR-Cas9 genome editing in Saccharomyces cerevisiae. Yeast. 2015;32:711-720. DOI 10.1002/yea.3098.

37. Lechner A., Brunk E., Keasling J.D. The need for integrated approaches in metabolic engineering. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2016; 8(11):a023903. DOI 10.1101/cshperspect.a023903.

38. Lee M.E., DeLoache W.C., Cervantes B., Dueber J.E. A highly characterized yeast toolkit for modular, multipart assembly. ACS Synth. Biol. 2015;4:975-986. DOI 10.1021/sb500366v.

39. Li T., Huang Sh., Zhao X., Wright D.A., Carpenter S., Spalding M.H., Weeks D.P., Yang B. Modularly assembled designer TAL effector nucleases for targeted gene knockout and gene replacement in eukaryotes. Nucleic Acids Res. 2011;39(14):6315-6325. DOI 10.1093/nar/gkr188.

40. Liu Z., Liang Y., Ang E.L., Zhao H. A new era of genome integration – simply cut and paste! ACS Synth. Biol. 2017;6(4):601-609. DOI 10.1021/acssynbio. 6b00331.

41. Makarova K.S., Wolf Y.I., Van der Oost J., Koonin E.V. Prokaryotic homologs of Argonaute proteins are predicted to function as key components of a novel system of defense against mobile genetic elements. Biol. Direct. 2009;4:29. DOI 10.1186/1745-6150-4-29.

42. Mali P., Yang L., Esvelt K.M., Aach J., Guell M., DiCarlo J.E., Norville J.E., Church G.M. RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science. 2013;339:823-826. DOI 10.1126/science.1232033.

43. Mans R., van Rossum H.M., Wijsman M., Backx A., Kuijpers N.G., van den Broek M., Daran-Lapujade P., Pronk J.T., van Maris A.J., Daran J.M. CRISPR/Cas9: a molecular Swiss army knife for simultaneous introduction of multiple genetic modifications in Saccharomyces cerevisiae. FEMS Yeast Res. 2015;15(2):Fov004. DOI 10.1093/femsyr/fov004.

44. Mojica F.J., Díez-Villaseñor C., García-Martínez J., Almendros C. Short motif sequences determine the targets of the prokaryotic CRISPR defence system. Microbiology. 2009;155(3):733-740. DOI 10.1099/mic.0.023960-0.

45. Nambu-Nishida Y., Nishida K., Hasunuma T., Kondo A. Development of a comprehensive set of tools for genome engineering in a coldand thermo-tolerant Kluyveromyces marxianus yeast strain. Sci. Rep. 2017;7(1):8993. DOI 10.1038/s41598-017-08356-5.

46. Ng H., Dean N. Dramatic improvement of CRISPR/Cas9 editing in Candida albicans by increased single guide RNA expression. mSphere. 2017;2(2):e00385-16. DOI 10.1128/mSphere.00385-16.

47. Nielsen J., Larsson C., van Maris A., Pronk J. Metabolic engineering of yeast for production of fuels and chemicals. Curr. Opin. Biotechnol. 2013;24(3):398-404. DOI 10.1016/j.copbio.2013.03.023.

48. Norton E.L., Sherwood R.K., Bennett R.J. Development of a CRISPRCas9 system for efficient genome editing of Candida lusitaniae. mSphere. 2017;2(3):e00217-17. DOI 10.1128/mSphere.00217-17.

49. Numamoto M., Maekawa H., Kaneko Y. Efficient genome editing by CRISPR/Cas9 with a tRNA-sgRNA fusion in the methylotrophic yeast Ogataea polymorpha. J. Biosci. Bioeng. 2017;124(5):487-492. DOI 10.1016/j.jbiosc.2017.06.001.

50. Ostrov N., Landon M., Guell M., Kuznetsov G., Teramoto J., Cervantes N., Zhou M., Singh K., Napolitano M.G., Moosburner M., Shrock E., Pruitt B.W., Conway N., Goodman D.B., Gardner C.L., Tyree G., Gonzales A., Wanner B.L., Norville J.E., Lajoie M.J., Church G.M. Design, synthesis, and testing toward a 57-codon genome. Science. 2016;353(6301):819-822. DOI 10.1126/science.aaf3639.

51. Ozaki A., Konishi R., Otomo C., Kishida M., Takayama S., Matsumoto T., Tanaka T., Kondo A. Metabolic engineering of Schizosaccharomyces pombe via CRISPR-Cas9 genome editing for lactic acid production from glucose and cellobiose. Metab. Eng. Commun. 2017;5:60-67. DOI 10.1016/j.meteno.2017.08.002.

52. Paddon C.J., Westfall P.J., Pitera D.J., Benjamin K., Fisher K., McPhee D., Leavell M.D., Tai A., Main A., Eng D., Polichuk D.R., Teoh K.H., Reed D.W., Treynor T., Lenihan J., Jiang H., Fleck M., Bajad S., Dang G., Dengrove D., Diola D., Dorin G., Ellens K.W., Fickes S., Galazzo J., Gaucher S.P., Geistlinger T., Henry R., Hepp M., Horning T., Iqbal T., Kizer L., Lieu B., Melis D., Moss N., Regentin R., Secrest S., Tsuruta H., Vazquez R., Westblade L.F., Xu L., Yu M., Zhang Y., Zhao L., Lievense J., Covello P.S., Keasling J.D., Reiling K.K., Renninger N.S., Newman J.D. High-level semi-synthetic production of the potent antimalarial artemisinin. Nature. 2013;496(7446):528-532. DOI 10.1038/nature12051.

53. Reider Apel A., d’Espaux L., Wehrs M., Sachs D., Li R.A., Tong G.J., Garber M., Nnadi O., Zhuang W., Hillson N.J., Keasling J.D., Mukhopadhyay A. A Cas9-based toolkit to program gene expression in Saccharomyces cerevisiae. Nucleic Acids Res. 2017;45(1):496-508. DOI 10.1093/nar/gkw1023.

54. Richard G.-F., Viterbo D., Khanna V., Mosbach V., Castelain L., Dujon B. Highly specific contractions of a single CAG/CTG trinucleotide repeat by TALEN in yeast. PLoS ONE. 2014;9(4):e95611. DOI 10.1371/journal.pone.0095611.

55. Ryan O.W., Cate J.H. Multiplex engineering of industrial yeast genomes using CRISPRm. Methods Enzymol. 2014;546:473-489. DOI 10.1016/B978-0-12-801185-0.00023-4.

56. Ryan O.W., Skerker J.M., Maurer M.J., Li X., Tsai J.C., Poddar S., Lee M.E., DeLoache W., Dueber J.E., Arkin A.P., Cate J.H.D. Selection of chromosomal DNA libraries using a multiplex CRISPR system. eLife. 2014;3:e03703. DOI 10.7554/eLife.03703.

57. Sanjana N.E., Cong L., Zhou Y., Cunniff M.M., Feng G., Zhang F. A transcription activator-like effector toolbox for genome engineering. Nat. Protocols. 2012;7(1):171-192. DOI 10.1038/nprot.2011.431.

58. Schwartz C.M., Hussain M.S., Blenner M., Wheeldon I. Synthetic RNA polymerase III promoters facilitate high-efficiency CRISPR-Cas9mediated genome editing in Yarrowia lipolytica. ACS Synth. Biol. 2016;5(4):356-359. DOI 10.1021/acssynbio.5b00162.

59. Shabalina S.A., Koonin E.V. Origins and evolution of eukaryotic RNA interference. Trends Ecol. Evol. 2008;23:578-587. DOI 10.1016/j.tree.2008.06.005.

60. Sheng J., Flick H., Feng X. Systematic optimization of protein secretory pathways in Saccharomyces cerevisiae to increase expression of Hepatitis B Small Antigen. Front. Microbiol. 2017;8:875. DOI 10.3389/fmicb.2017.00875.

61. Shi S., Liang Y., Zhang M.M., Ang E.L., Zhao H. A highly efficient single-step, markerless strategy for multi-copy chromosomal integration of large biochemical pathways in Saccharomyces cerevisiae. Metab. Eng. 2016;33:19-27. DOI 10.1016/j.ymben.2015.10.011.

62. Stovicek V., Borodina I., Forster J. CRISPR-Cas system enables fast and simple genome editing of industrial Saccharomyces cerevisiae strains. Metab. Eng. Commun. 2015;2:13-22. doi.org/10.1016/j.meteno.2015.03.001.

63. Swarts D.C., Hegge J.W., Hinojo I., Shiimori M., Ellis M.A., Dumrongkulraksa J., Terns R.M., Terns M.P., van der Oost J. Argonaute of the archaeon Pyrococcus furiosus is a DNA-guided nuclease that targets cognate DNA. Nucleic Acids Res. 2015a;43(10):5120-5129. DOI 10.1093/nar/gkv415.

64. Swarts D.C., Koehorst J.J., Westra E.R., Schaap P.J., van der Oost J. Effects of Argonaute on gene expression in Thermus thermophiles. PLoS ONE. 2015b;10(4):e0124880. DOI 10.1371/journal.pone.0124880.

65. Swarts D.C., Makarova K., Wang Y., Nakanishi K., Ketting R.F., Koonin E.V., Patel D.J., van der Oost J. The evolutionary journey of Argonaute proteins. Nat. Struct. Mol. Biol. 2014;21(9):743-753. DOI 10.1038/nsmb.2879.

66. Vanegas K.G., Lehka B.J., Mortensen U.H. SWITCH: a dynamic CRISPR tool for genome engineering and metabolic pathway control for cell factory construction in Saccharomyces cerevisiae. Microb. Cell Fact. 2017;16(1):25. DOI 10.1186/s12934-017-0632-x.

67. Vogel J. A bacterial seek-and-destroy system for foreign DNA. Science. 2014;344:972-973. DOI 10.1126/science.1252962.

68. Vyas V.K., Barrasa M.I., Fink G.R. A Candida albicans CRISPR system permits genetic engineering of essential genes and gene families. Sci. Adv. 2015;1(3):e1500248. DOI 10.1126/sciadv.1500248.

69. Walter J.M., Chandran S.S., Horwitz A.A. CRISPR-cas-assisted multiplexing (CAM): simple same-day multi-locus engineering in yeast. J. Cell Physiol. 2016;231:2563-2569. DOI 10.1002/jcp.25375.

70. Wang L., Lin J., Zhang T., Xu K., Ren Ch., Zhang Zh. Simultaneous screening and validation of effective zinc finger nucleases in yeast. PLoS ONE. 2013;8(5):e64687. DOI 10.1371/journal.pone.0064687.

71. Wang Y., Wei D., Zhu X., Pan J., Zhang P., Huo L., Zhu X. A ʻsuicideʼ CRISPR-Cas9 system to promote gene deletion and restoration by electroporation in Cryptococcus neoformans. Sci. Rep. 2016;6: 31145. DOI 10.1038/srep31145.

72. Weninger A., Hatzl A.-M., Schmid C., Vogl T., Glieder A. Combinatorial optimization of CRISPR/Cas9 expression enables precision genome engineering in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. J. Biotechnol. 2016;235:139-149. DOI 10.1016/j.jbiotec.2016.03.027.

73. Wriessnegger T., Pichler H. Yeast metabolic engineering–targeting sterol metabolism and terpenoid formation. Progr. Lipid Res. 2013; 52(3):277-293. DOI 10.1016/j.plipres.2013.03.001.

74. Zhang G.C., Kong I.I., Kim H., Liu J.J., Cate J.H., Jin Y.S. Construction of a quadruple auxotrophic mutant of an industrial polyploidy Saccharomyces cerevisiae using RNA-guided Cas9 nuclease. Appl. Environ. Microb. 2014;80:7694-7701. DOI 10.1128/ AEM.02310-14.


Дополнительные файлы

Просмотров: 184

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2500-0462 (Print)
ISSN 2500-3259 (Online)